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PCR凈化實(shí)驗(yàn)室裝修設(shè)計(jì)方案,昆山清陽凈化工程是為實(shí)驗(yàn)室工作人員搭建一個(gè)安全、環(huán)保、美觀、舒適、智能的實(shí)驗(yàn)室,基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)又稱PCR ,其特點(diǎn)是能將微量的DNA 大幅增加,PCR 是分子生物研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法,廣泛應(yīng)用于微生物各個(gè)領(lǐng)域,例如:檢驗(yàn)艾滋病、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的檢測和診斷,DNA 指紋、個(gè)體識(shí)別、親子鑒定以及法醫(yī)物證,動(dòng)、植物檢疫,動(dòng)物及其衍生產(chǎn)品的檢測,動(dòng)物飼料、化妝品、食品衛(wèi)生檢測,轉(zhuǎn)基因作物與轉(zhuǎn)基因微生物檢測等。
一、 PCR凈化實(shí)驗(yàn)室平面布局
基因?qū)嶒?yàn)室又稱PCR 實(shí)驗(yàn)室,實(shí)驗(yàn)室原則上分為4個(gè)單獨(dú)的工作區(qū)域,前兩去為擴(kuò)增前區(qū),后兩區(qū)為擴(kuò)增后區(qū)。擴(kuò)增前區(qū)與擴(kuò)增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開。實(shí)驗(yàn)材料、試劑、記錄紙、筆、清潔材料等,只能從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū),即從試劑準(zhǔn)備區(qū)→樣品制備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū),不得逆向流動(dòng)。實(shí)驗(yàn)室的氣流也應(yīng)從擴(kuò)增前區(qū)流向擴(kuò)增后區(qū),不得逆向流動(dòng)。各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)置緩沖間, 工作間與緩沖間之間宜安裝連鎖裝置。不同功能的核酸檢驗(yàn)工作區(qū)應(yīng)是分隔獨(dú)立的工作室,并有明顯的標(biāo)志,各區(qū)間不能直通。各區(qū)之間如果是緊密相連,需安裝物品傳遞窗。每個(gè)工作區(qū)域的頂部應(yīng)安裝紫外燈,紫外燈的波長為254nm 安裝數(shù)量為每20㎡安裝一直40W 的紫外燈。 實(shí)驗(yàn)室較為理想的布局模式為有一個(gè)專用走廊,試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)和產(chǎn)物分析區(qū)很規(guī)范地排列在一起,前三個(gè)區(qū)各有一個(gè)緩沖間,可供換工作服和工作鞋使用,頂上可安裝一紫外燈。內(nèi)實(shí)驗(yàn)區(qū)域設(shè)為正壓或常壓狀態(tài),緩沖間內(nèi)設(shè)為負(fù)壓狀態(tài)(可上設(shè)一抽風(fēng)裝置),使這三個(gè)區(qū)的空氣流向?yàn)橛袑?shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)向外,緩沖間內(nèi)通向內(nèi)實(shí)驗(yàn)室和走廊的門可安裝一種連鎖裝置,當(dāng)一個(gè)門打開時(shí),另一門必須處于關(guān)閉狀態(tài),防止出現(xiàn)兩個(gè)門同時(shí)打開的情況。產(chǎn)物分析區(qū)可不設(shè)緩沖間,但應(yīng)設(shè)為負(fù)壓狀態(tài)(裝一個(gè)排風(fēng)扇即可),使空氣流向由外向內(nèi),以防止擴(kuò)增產(chǎn)物對空氣流出。每一區(qū)域都須有明確的標(biāo)記,工作按試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)至產(chǎn)物分析區(qū)單一流向進(jìn)行,各區(qū)的儀器設(shè)備包括工作服、鞋、實(shí)驗(yàn)記錄本和筆都必須專用。如果無法做到以上模式,以下基本要求必須做到:
(1) 四個(gè)區(qū)域必須是相互獨(dú)立的。
(2) 各區(qū)域的儀器設(shè)備及各種物品必須是專用的。
(3) 各區(qū)完全獨(dú)立,緩沖間可有可無。如為一個(gè)區(qū)套一個(gè)區(qū)的模式,區(qū)間不能直通,應(yīng)有緩沖間,供換工作服及鞋子用,并保證兩個(gè)區(qū)域間始終處于完全分隔狀態(tài)。
(4) 產(chǎn)物分析區(qū)應(yīng)安裝排風(fēng)扇及其他抽風(fēng)裝置,持續(xù)負(fù)壓。
二、 各區(qū)功能及主要設(shè)備
(1) 試劑準(zhǔn)備區(qū):擴(kuò)增試劑的配置、分裝和保存。未設(shè)緩沖間的試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū),工作區(qū)域?yàn)檎龎骸S糜跀U(kuò)增的試劑應(yīng)冰凍儲(chǔ)存。主要設(shè)備有天平、冰箱、離心機(jī)、加樣器、振蕩器、紫外燈。
(2) 樣品制備區(qū): 實(shí)驗(yàn)室樣品的混樣和測試樣品的制備。未設(shè)緩沖間時(shí)工作區(qū)域?yàn)樨?fù)壓或減壓,可安裝排風(fēng)系統(tǒng)。所有的器具在使用前應(yīng)經(jīng)過徹底清洗并消毒,防止交叉污染。主要設(shè)備有冰箱、生物安全柜(或潔凈工作臺(tái)、排風(fēng)柜)、離心機(jī)、加樣器、振蕩器、恒溫水浴、上下水裝置、廢棄物容器、紫外燈。根據(jù)制備樣品的性質(zhì)和要求決定操作臺(tái)是選用生物安全柜、潔凈工作臺(tái)還是排毒柜,如疾病控制中心、臨床醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室一般選用生物安全柜,植物轉(zhuǎn)基因、檢疫等可選用排毒柜樣品制備需要較高潔凈條件的選用潔凈工作臺(tái)。
(3) 擴(kuò)增區(qū):PCR 擴(kuò)增反應(yīng)體系的配置和模板的加入,核酸擴(kuò)增。未設(shè)緩沖間的擴(kuò)增區(qū),工作間區(qū)域?yàn)樨?fù)壓或減壓,可安裝排風(fēng)系統(tǒng)。加樣應(yīng)在超凈工作臺(tái)(生物安全柜)內(nèi)進(jìn)行,超凈工作臺(tái)的氣流方向一選擇垂流式。核酸擴(kuò)增設(shè)備、冰箱、潔凈工作臺(tái)、離心機(jī)、加樣器、廢棄物容器、紫外燈。
(4) 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū):擴(kuò)增產(chǎn)物的測定。未設(shè)緩沖間的擴(kuò)增產(chǎn)物區(qū),工作區(qū)域?yàn)樨?fù)壓或減壓,用安裝排風(fēng)系統(tǒng)。若實(shí)驗(yàn)僅采用全自動(dòng)擴(kuò)增檢測儀 (如實(shí)時(shí)熒光定量PCR 儀),可將擴(kuò)增區(qū)與擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)合并為一個(gè)區(qū)。本區(qū)所使用的儀器設(shè)備有酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、加樣器和水浴鍋等。
三、 潔凈實(shí)驗(yàn)室空條通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計(jì)及壓力控制
各個(gè)區(qū)域之間應(yīng)具備單相的實(shí)驗(yàn)工藝流、物流、人流和氣流,形成單相流程,形成單向流程的保護(hù)屏障,避免實(shí)驗(yàn)之間的相互干擾,防止核酸氣溶膠對實(shí)驗(yàn)過程造成污染產(chǎn)生假性結(jié)果。 PCR 實(shí)驗(yàn)室并沒有嚴(yán)格的凈化要求,但是為避免各個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時(shí),要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)的壓力要求。
四、 無菌實(shí)驗(yàn)室裝修
實(shí)驗(yàn)室的墻體,包括頂棚,應(yīng)結(jié)構(gòu)牢固、氣密性好;所有陰角宜采用圓弧形線條過渡;墻體內(nèi)壁光潔、不吸附、耐腐蝕、易清洗消毒、;地面材料應(yīng)滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。地面建議采用PVC 卷材地面或自流坪地面,整體性好,便于進(jìn)行清掃,耐腐蝕。沒有條件的也可采用水磨石地面,或大塊的瓷磚(≥800mm )接縫需要小于2mm 。燈具要選取凈化燈具,能達(dá)到便于清洗、不積塵的特點(diǎn)。 在三個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)和三個(gè)緩沖區(qū)頂部以及傳送窗內(nèi)部安裝有紫外燈,供消毒用。在試劑準(zhǔn)備區(qū)和樣品制備區(qū)還設(shè)置移動(dòng)紫外燈,對實(shí)驗(yàn)桌進(jìn)行局部消毒。 試劑和標(biāo)本通過機(jī)械連鎖不銹鋼傳遞窗傳遞,保證試劑和標(biāo)本在傳遞過程中不受污染。 試劑和樣品通過機(jī)械連鎖不銹鋼(不建議使用電子連鎖方式)傳遞窗傳遞,保證試劑和樣品在傳遞過程中不受污染(人物分流)。
五、 注意問題
(1) 幾個(gè)區(qū)域的大小設(shè)置情況,應(yīng)該是試劑準(zhǔn)備區(qū)、產(chǎn)物擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增分析區(qū)、要小一些。樣品制備區(qū)應(yīng)大一些。因?yàn)闃悠分苽涫乙乐挂粋€(gè)生物安全柜和一個(gè)低溫冰箱。
(2) 試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品制備區(qū)設(shè)立緊急洗眼器,以備不時(shí)之需。
(3) PCR 實(shí)驗(yàn)室的結(jié)晶度可以根據(jù)用戶的實(shí)際使用情況和資金投入來設(shè)計(jì)。
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